Fluoreskeca resonanca energitransigo (FRET)
Fluoreskeca resonanca energitransigo (FRET) estas ne-radiativa energitransiga procezo en kiu la donacanto ekscitita ŝtatenergio estas transdonita al la akceptanto ekscitita ŝtato tra la interagado de intermolekulaj elektraj paroj.Ĉi tiu procezo ne implikas fotonojn kaj estas tial ne-radiativa.Ĉi tiu provo havas la avantaĝojn de esti rapida, sentema kaj simpla.
La tinkturfarbo uzita en la FRET-analizo povas esti identa.Sed en la plej multaj aplikoj, malsamaj tinkturfarboj estas fakte uzitaj.Mallonge, la translokigo de luma resonanca energio estas la translokigo de paro de dipoloj de la organdonacanto (farbo 1) ĝis la akceptanto (farbfarbo 2) kiam la organdonaca grupo estas ekscitita.Ĝenerale, la emisiospektro de la Donor-fluoroforgrupo interkovras kun la sorbada spektro de la Acceptor-grupo."Kiam la distanco inter la du fluoroforoj taŭgas (10-100 A), oni povas observi la translokigon de fluoroforenergio de la organdonacanto ĝis la akceptanto."La metodo de energitransigo dependas de la kemia strukturo de la ricevilo:
1. Estas konvertita en molekula vibrado, tio estas, la hela lumo de energitransigo malaperas.(La ricevilo estas lum-estingilo)
2. La emisio estas pli intensa ol la ricevilo mem, rezultigante ruĝenŝovon en la sekundara fluoreskeca spektro."(Receptoroj estas lumaj elsendiloj).
La helpdongrupo (EDANS) kaj akceptanto geno (DABCYL) estas unuforme ligitaj al la natura substrato de HIV-proteazo, kaj kiam la substrato ne estas malkonektita, DABCYL povas estingi EDANS kaj tiam iĝi nerimarkebla al fluoro.Sur HIV-1-proteazmalkonekto, EDANS jam ne estas estingita per DABCYL, kaj EDANS-luciferazoj poste povas esti detektitaj.La havebleco de proteazinhibitoroj povas esti monitorita per ŝanĝoj en la fluoreskecintenseco de EDANS.
FRET-peptidoj estas oportunaj iloj por studi peptidaz-nespecifecon.Ĉar ĝia reagprocezo povas esti kontinue monitorita, ĝi disponigas oportunan metodon por detekti enzimaktivecon.La brilo produktita post la hidrolizo de peptidligoj fare de la organdonacanto/akceptanto disponigas kvanton de enzimaktiveco ĉe nanomolaraj koncentriĝoj.Kiam la FRET-peptido estas sendifekta, ĝi montras subitan malaperon de la interna fulmo, sed kiam iu peptidligo kontraŭ la donacanto/akceptanto rompas, ĝi liberigas fulmon, kiu povas esti detektita ade kaj la enzimagado tiam povas esti kvantigita.
Afiŝtempo: Aŭg-14-2023