Transfer energii rezonansu fluorescencyjnego (FRET)
Przenoszenie energii rezonansu fluorescencyjnego (FRET) to nie promieniujący proces transferu energii, w którym energia stanu wzbudzonego dawcy jest przenoszona do stanu wzbudzonego akceptora poprzez interakcję międzycząsteczkowych par elektrycznych. Proces ten nie obejmuje fotonów i dlatego nie jest promieniujący. Ten test ma zalety bycia szybkim, wrażliwym i prostym.
Barwnik użyty w teście FRET może być identyczny. Ale w większości aplikacji faktycznie używane są różne barwniki. W skrócie, przeniesienie energii rezonansu świetlnego jest przeniesieniem pary dipoli od dawcy (barwnika 1) do akceptora (barwnik 2), gdy grupa dawcy jest wzbudzona. Ogólnie rzecz biorąc, widmo emisji grupy fluoroforu dawcy pokrywa się z widmem absorpcyjnym grupy akceptorowej. „Gdy odległość między dwoma fluoroforami jest odpowiednia (10 - 100 a), można zaobserwować przeniesienie energii fluoroforu z dawcy do akceptora”. Metoda transferu energii zależy od struktury chemicznej receptora:
1. Jest przekształcane w wibracje molekularne, to znaczy znika światło transferu energii. (Receptor jest lekkim hartowaniem)
2. Emisja jest bardziej intensywna niż sam receptor, co powoduje przesunięcie ku czerwieni w wtórnym spektrum fluorescencji. ” (Receptory to emitery świetliste).
Grupa dawcy (EDANS) i gen akceptora (dabcyl) są jednolicie powiązane z naturalnym podłożem proteazy HIV, a gdy substrat nie jest odłączony, dabcyl może Quenle Edans, a następnie stają się niewykrywalne dla fluoru. Po odłączeniu proteazy HIV-1 EDANS nie jest już wygaszany przez Dabcyl, a edans lucyferazy można następnie wykryć. Dostępność inhibitorów proteazy można monitorować poprzez zmiany intensywności fluorescencji EDAN.
Peptydy FRET są wygodnymi narzędziami do badania peptydazy niespecyficzności. Ponieważ proces reakcji można stale monitorować, zapewnia wygodną metodę wykrywania aktywności enzymu. Łuć wytwarzany po hydrolizy wiązań peptydowych przez dawcę/akceptor zapewnia miarę aktywności enzymu w stężeniach nanomolarnych. Gdy peptyd FRET jest nienaruszony, wykazuje nagłe zniknięcie wewnętrznego lampy błyskowej, ale gdy każde wiązanie peptydowe naprzeciwko pęknięcia dawcy/akceptora uwalnia błysk, który można wykryć w sposób ciągły, a aktywność enzymu można następnie określić ilościowo.
Czas postu: 2025-07-02